Esquema general de trabajo

Una vez pasado el período de incubación adecuado tras la siembra de las muestras (24/48 horas, de pendiendo de los microorganismos que esperemos encontrar) procederemos a estudiar el crecimiento bacteriano en los distintos medios de cultivo.

Se observan las placas incubadas en distintas atmósfera (ambiente, CO2, anaerobia, etc) y se estudia el crecimiento en los distintos medios, prestando atención a la forma, color y tamaño de las colonias, valorando la presencia de hemólisis o el viraje de color en los medios con indicadores, el posible satelitismo de algunas colonias, etc. Se comprueba la correspondencia de los distintos tipos de colonias que crezcan en los medios incubados en distintas atmósferas y en distintos medios de cultivo, de forma especial el crecimiento en medios selectivos o diferenciales.

Ahora podemos preparar frotis para hacer tinciones GRAM de los distintos tipos de colonias que hayamos decidido aislar o que nos resulten dudosas.

Al observar al microscopio el GRAM de cada colonia, estudiamos la forma y color de las células que aparezcan (si se ha picado una sola colonia, tenemos que ver un solo tipo de bacteria, sin perder de vista que hay bacterias claramente pleomórficas). Así comprobamos si son cocos (redondos) o bacilos (alargados), positivos (azul) o negativos (rojo). En este momento se pueden realizar unas cuantas pruebas rápidas que permitirán matizar aun más los datos que ya tenemos: el test de Catalasa sobre una colonia extendida en un porta indicará si los CGP son Estafilococos (Catalasa+) o Estreptococos (Catalasa-), el test de KOH permitirá aclarar si esa colonia mucosa es un BGP desteñido (decoloración excesiva del GRAM) o un BGN. Un disco de Oxidasa permitirá diferenciar a las Enterobacteriaceas, etc

Llegados a este punto, en un cultivo puro o en un cultivo con crecimiento bacteriano variado pero con las diferentes colonias bien aisladas, se podría pasar directamente a identificar el/los microorganismos (panel MicroScan o galería Api+ATB). De no tener claro este paso directo, hay que proceder a preparar aislamientos de las diferentes colonias en los medios que consideremos más adecuados e incubarlos en las atmósferas que se necesite (ambiente, CO2, anaerobiosis, etc). También puede ser el momento de inocular medios de cultivo especiales (TSI/Kligler, O/F, etc) o de hacer pruebas especiales de crecimiento (test respiratorio, sensibilidad/resistencia a ciertos antibióticos diferenciales, etc)